新聞中心您的位置:網(wǎng)站首頁(yè) >新聞中心 >熒光定量pcr技術(shù)原理是怎樣的?

熒光定量pcr技術(shù)原理是怎樣的?

更新時(shí)間:2024-11-17   點(diǎn)擊次數(shù):314次
  熒光定量pcr技術(shù)是一種在PCR擴(kuò)增反應(yīng)中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。以下是對(duì)其技術(shù)原理的詳細(xì)解釋:
  
  1、熒光化學(xué)物質(zhì)的使用:
  
  熒光染料和探針是兩種主要的熒光化學(xué)物質(zhì)。非特異性檢測(cè)方法使用過量的熒光染料,如SYBRGreenI,這些染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后發(fā)射出熒光信號(hào)。特異性檢測(cè)方法則利用標(biāo)記有熒光染料的基因特異寡核苷酸探針來識(shí)別擴(kuò)增產(chǎn)物。
  
  2、Ct值與起始模板量的關(guān)系:
  
  在PCR擴(kuò)增的指數(shù)期,模板的Ct值(即每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號(hào)到達(dá)設(shè)定閾值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù))與其起始拷貝數(shù)之間存在線性關(guān)系。這意味著,通過測(cè)量Ct值,可以推算出起始模板的數(shù)量。
  

熒光定量pcr技術(shù)

 

  3、標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立:
  
  為了對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析,需要首先建立一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線。這通常通過使用一系列已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行PCR擴(kuò)增,并測(cè)量其Ct值來實(shí)現(xiàn)。然后,將Ct值與標(biāo)準(zhǔn)品的起始拷貝數(shù)對(duì)數(shù)作圖,得到一條標(biāo)準(zhǔn)曲線。這樣,只要獲得未知樣品的Ct值,即可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算出該樣品的起始拷貝數(shù)。
  
  4、實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)與定量:
  
  qPCR技術(shù)的核心在于實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)PCR進(jìn)程中的熒光信號(hào)變化。隨著PCR循環(huán)的進(jìn)行,熒光信號(hào)逐漸增強(qiáng),當(dāng)信號(hào)達(dá)到預(yù)設(shè)的閾值時(shí),記錄此時(shí)的循環(huán)次數(shù)(Ct值)。由于熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加全同步,因此可以通過測(cè)量熒光信號(hào)的變化來實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)PCR進(jìn)程,并最終實(shí)現(xiàn)對(duì)起始模板的定量分析。
  
  總的來說,熒光定量PCR技術(shù)結(jié)合了PCR技術(shù)的高靈敏性和光譜技術(shù)的高精確性,使得DNA定量分析更加準(zhǔn)確、快速和方便。它廣泛應(yīng)用于基因表達(dá)研究、病原體檢測(cè)、腫瘤基因檢測(cè)等多個(gè)領(lǐng)域。

聯(lián)


主站蜘蛛池模板: 假山后面的呻吟喘息h| 国产日产一区二区三区四区五区| 免费观看中文字幕| 国产v亚洲v天堂a无| 成人免费视频软件网站| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 青青草国产青春综合久久| 国产精品无码久久四虎| 久久97久久97精品免视看秋霞| 青青青国产精品一区二区| 国产精品亚洲专区无码不卡| 97成人在线视频| 好男人什么影院| 久久精品国产亚洲| 欧美乱大交xxxxx另类| 午夜a级理论片在线播放| 非洲黑人最猛性xxxx_欧美| 成人亚洲综合天堂| 久久久久久国产精品视频| 欧美日韩国产专区| 同性女电影三级中文字幕| 老司机精品免费视频| 国内精品久久久久影院日本| h在线观看免费| 好男人视频社区精品免费| 一级特黄a大片免费| 最新中文字幕在线观看| 亚洲午夜电影一区二区三区| 欧美综合亚洲图片综合区| 四虎影视www| 日本视频一区在线观看免费| 国产精品福利一区二区久久| 97午夜理伦片在线影院| 成年人视频在线免费播放| 久久久久成人精品无码中文字幕| 日韩电影在线看| 亚洲欧美日韩在线精品一区二区| 玩山村女娃的小屁股| 人妻少妇精品中文字幕av蜜桃| 色噜噜视频影院| 国产精品12页|